猪伪狂犬病毒抗体 PRV）检测试剂盒 ELISA）

仅供科研使用，不得用于临床检验。

猪伪狂犬病毒抗体（PRV）检测试剂盒（ELISA）
说明书


货号：INS0010008


    使用前，请务必仔细阅读说明书，如有不清楚的，请拨打24h技术支持专线联系我们，咨询清楚再进行实验。





【产品名称】
通用名称：猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒（ELISA）
英文名称：Test Kit for Antibodies to Porcine Pseudorabies Virus（ELISA）

【包装规格】
 48T/盒，96T/盒
【预期用途】
本试剂用于检测猪血清中伪狂犬病毒抗体，可用于猪伪狂犬病毒抗体疫苗*效果评价。

【检验原理】
本试剂盒采用酶联*吸附试验（ELISA）。在预包被猪伪狂犬病毒抗体抗原（固相抗原，货号：INS0010008C）的微孔酶标板中，加入猪伪狂犬病毒抗体阴阳性对照（货号：INS0010008J）和待测样本，温育洗涤，再加入另一株HRP标记的酶标抗体（酶标抗体，货号：INS0010008E），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗体-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 酸）作用下，较终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中猪伪狂犬病毒抗体的浓度正相关，通过测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪伪狂犬病毒抗体。

【主要组成成分】
主要成分
组分	        数量	        主要成分
阴性对照	1.0ml/管	不含待测物的缓冲液
阳性对照	1.0ml/管	含待测物的缓冲液
包被微孔板	96T	        预包被固相抗原
HRP标记抗体	11mL	        HRP标记的检测抗体
样品稀释液	30mL	        样品稀释缓冲液
底物液A	        6mL	        工作液
底物液B	        6mL	        TMB工作液
20×浓缩洗涤液	30mL	        含0.15%Tween20的PBS
终止液	        6mL	        酸
说明书	        1份	        --
自封袋	        1个	        --
不干胶	        2片	        --
稀释板	        1块	        --
阴阳性对照已经通过测试，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的*措施。

需要但未提供的材料及耗材
  1、酶标仪
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml量筒
	无粉一次性乳胶手套

【储存条件及有效期】
  1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
  2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
  3、开封后，按照建议的条件保存，样品稀释液、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为28天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】
  半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。

【样本要求】
  样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮做为防腐剂。
	血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
	用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
	浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

样本保存和稳定性
样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

【检验方法】
试剂准备
1、使用前，所有的组分都要至少复温2h，确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后10分钟内使用。

操作程序
1、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
4、设置阴阳性对照孔、样本孔，阴阳性对照孔各加对照品100μL，样本孔加稀释后样本100μL。
5、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
6、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
7、所有孔加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。
8、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
8、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
9、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育10min。
   10、每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值），无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。

【参考值】
实验正常的情况下，阴性对照≤0.12，阳性对照≥0.58。
【检验结果的解释】
1.样品A值≥0.37为阳性；样品A值在0.2到0.37之间为可疑；样品A值＜0.2为阴性。
2.本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。
【检验方法的局限性】
1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。
2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。
3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。
4、使用试剂盒配套的样品稀释液。
5、如果样本值**较高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。
6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排除该因素。
7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

【产品性能指标】
1、物理性能
试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。
2、阴性结果
阴性对照的OD值不**0.12。
3、阳性结果
阳性对照的OD值不低于0.55。
4、特异性
本试剂盒识别**和重组猪伪狂犬病毒抗体，与结构类似物无交叉。
5、稳定性
2℃-8℃保存，有效期6个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，使用期限为28天。

【注意事项】
生物*
1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。

技术提示
1、混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。
4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

废物处理
  所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。